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生命科学样品制备篇-石蜡包埋组织切片

发表时间: 2020-05-19 11:25:32

作者: 上海良允科学仪器有限公司

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拉曼光谱是一种无损、无标记、非接触式的“指纹图谱”分析检测技术,可以为生命科学/医学研究领域的样品提供丰富的分子层面的信息。生命科学/医学研究样品有许多不同的处理和保存方法,本系列教程将介绍如何对生命科学/医学研究样品进行处理及不同处理方法如何进行拉曼测试准备。

石蜡包埋组织切片制样

1.取材

  • 取新鲜组织,用刀片单向切割至所需大小

2.固定

  • ◆ 将切好的组织置于4%的多聚甲醛(4% PFA)中在4 ℃条件下固定24 h以上;
  • ◆ 对于水分多的组织,中间应更换1~2次新固定液。

3.洗涤 

  • ◆ 将组织从固定液中取出,立即用去离子水对组织进行反复清洗,确保组织内固定液及结晶沉淀被清洗干净
  • ◆ 将清洗好的组织平整地置于脱水盒内。

4.脱水

将脱水盒装入脱水篮置于脱水机内进行梯度酒精脱水:


  •                                                                    
  • ◆ 纯酒精为无水乙醇;
  • ◆ 对于较小的组织,为防止脱水皱缩,可从30%酒精开始梯度脱水。每个梯度脱水时间可根据组织大小调整。
  • 5.透明
  • ◆ 以二甲苯替换出组织中的酒精,便于后续浸蜡包埋。
  • ◆ 逐级置换:二甲苯I 5-10 min → 二甲苯II 5-10 min → 二甲苯III 5-10 min → 二甲苯IV 5-10 min。

6.浸蜡

  • ◆ 将组织留在透明剂内,在透明剂上轻轻倒上一层已融化的石蜡,体积比约3:2;
  • ◆ 随后将组织置于35-37 ℃熔蜡炉内,至石蜡凝固;
  • ◆ 将整体移入56-60 ℃恒温箱中停留2-5 h,待石蜡彻底融化;
  • 换2-3次新鲜纯石蜡,将组织内的透明剂全部排除。

7.包埋

  • ◆ 按包埋面要求将组织块放入盛有蜡液的包埋框内,并贴上对应的标签。
  • ◆ 于-20 ℃冷冻台/冰箱进行冷却,石蜡凝固后取出包埋蜡块并进行修整。
  • 8.切片
  • ◆ 将修整好的蜡块置于石蜡切片机上进行切片,按照需求切不同厚度样品。
  • ◆ 切片漂浮于摊片机的40 ℃温水上并将组织展平,用洁净载玻片将已展开的组织捞起,使其位于载玻片中央,放入60 ℃烘箱内烤片48h。
  • ◆ 待水烤干、蜡烤化后取出常温备存。

9.脱蜡复水

  • ◆ 准备:将组织切片在室温放置1 h或60 ℃恒温箱20 min;
  • ◆ 脱蜡复水:按如下步骤进行脱蜡复水

10.拉曼测试

  • 脱蜡复水后的切片室温干燥后即可进行拉曼光谱及成像测量


石蜡包埋组织切片拉曼分析实例

动脉粥样硬化斑块中平滑肌细的免疫检测:免疫荧光(A、B)和免疫SERS(C、D)成像。A:平滑肌肌动蛋白(红色)、细胞核(蓝色)、弹性纤维(绿色)、剩余血管区域(深绿色);B:平滑肌肌动蛋白;C:平滑肌肌动蛋白免疫SERS分布(以4-NTB位于1340cm-1处峰为标记成像,4-NTB可与抗平滑肌肌动蛋白结合);D:平滑肌细胞免疫SERS聚类分析结果;


参考文献:

DOI:10.1016/j.bios.2019.02.068


生命科学样品拉曼测试解决方案

                                           “德国WITec alpha300系列显微共聚焦拉曼光谱仪优异的共聚焦性能、超高的空间分辨率、超快的成像速度大大节约了研究时间,缩短了研究周期。”


致谢

感谢中国科学院生态环境研究中心、长春应化所各位老师同学的大力支持与帮助!

感谢上海氘峰医疗科技有限公司的大力支持与帮助!


版权

此样品处理内容版权归属于德国威泰克科学仪器与技术股份有限公司,转载请注明出处



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